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“流”例说 | 解密 B 细胞精细分型的临床应用
1247 人阅读发布时间：2025-03-28 10:42
引言
作为体液免疫的核心执行者， B 淋巴细胞通过识别特异性抗原启动免疫应答，并分化为浆细胞和记忆性 B 细胞等功能亚群。本文将详细解析 B 细胞精细分型在疾病预警、疾病诊断、疗效评估、预后监测等多方面的临床应用。
B 细胞及其亚型
B 细胞在体液和细胞介导的免疫反应中发挥着关键作用。B 细胞由不同的亚群组成，具体取决于其发育或增殖状态、位置和功能。 B 细胞产生“天然”抗体作为先天免疫的一部分，也产生特异性抗体参与适应性免疫反应。
B 细胞来源于骨髓中的造血干细胞，在骨髓发育成熟的纯真 B 细胞离开骨髓迁入周围淋巴器官和淋巴组织，纯真 B 细胞受抗原刺激后分化为产生抗体的浆细胞和长寿记忆性 B 细胞，发挥重要免疫功能，包括分泌抗体介导体液免疫应答、递呈抗原、分泌细胞因子参与免疫调节、参与炎症反应等。
外周血中幼稚 B 细胞极少，成熟 B 细胞的标志包括 CD19+CD20+CD10- 。根据 CD20 、 CD27 、 CD38 、 IgD 可以将 B 细胞进一步区分为初始 B 细胞（ CD27-IgD+ ）、 CD27- 记忆型 B 细胞（ CD27-IgD- ）、未转换记忆 B 细胞（ CD27+IgD+ ）、类型转换记忆 B 细胞（ CD27+IgD- ）和浆母细胞（ CD27+CD20-CD38hi ）。IgD 在 B 细胞对抗原产生反应后表达逐渐升高，在记忆 B 细胞表面的 IgD 转变为 IgG 、 IgA 或 IgE 时， B 细胞从未转换记忆 B 细胞转换为类型转换记忆 B 细胞，并进一步转换为浆母细胞，开始大量分泌抗体。
图1. B 淋巴细胞分化发育
近年来，一种参与先天免疫的 B 细胞亚群—— B1 细胞（ CD5+CD19+ ）越来越引起重视。有人认为 B1 细胞的功能为履行管家作用、调节炎症和促进对“自我”的耐受性。
图2. B1 细胞的表型和功能
B 细胞精细分型的临床意义
01 辅助诊断和监测原发性免疫缺陷病（ PID ）
重症联合免疫缺陷 ( SCID )是一组由参与免疫系统发育和功能形成的不同基因突变引起的罕见疾病。根据免疫表型和潜在的遗传缺陷，可以对不同类型的 SCID 进行分类（图 3 ）：没有T细胞但有 B 细胞（ T-B+ SCID ）的 SCID 、没有 T 和 B 细胞的 SCID （ TB- SCID ）、前两种合并有或没有自然杀伤 ( NK ) 细胞的 SCID 。不同类型的 SCID 中 B 细胞亚群有不同表现。
图3. 各种免疫缺陷病与 B 细胞亚群表达情况
普通变异型免疫缺陷病 ( CVID ) 是最常见的原发性免疫缺陷病 ( PID )。它的特征是低丙种球蛋白血症和特异性抗体的产生受损。近年来，已经提出了几种分类，包括基于 B 细胞群表型的鉴别。 如记忆 B 细胞中 CD27 表达的下调表明生发中心受损。CD40L 基因缺陷（ CD40L deficiency ）会干扰 B-T 相互作用，影响 T 细胞依赖的(转换)记忆 B 细胞的生成，外周免疫表现为循环 B 细胞总数正常，且主要由初始或未转换记忆 B 细胞组成，而类型转换记忆 B 细胞缺如。
因此，利用流式细胞术检测不同的 B 细胞亚群可以辅助诊断并进一步对免疫缺陷病进行鉴别和分类。
02 早期识别噬血细胞性淋巴组织细胞增多症（ HLH ）
噬血细胞性淋巴组织细胞增多症（ HLH ）是一种遗传性或获得性免疫调节功能异常导致的淋巴细胞、单核细胞和巨噬细胞异常激活、增殖和分泌大量炎性细胞因子引起的过度炎症反应综合征，分为原发性 HLH （ pHLH ）和继发性 HLH （ sHLH ）两大类，可导致多器官功能障碍和死亡。
研究表明，在新诊断 sHLH 患者中，外周血淋巴细胞亚群失衡，表现为各淋巴细胞亚群数量明显减少，同时伴有 T 细胞、 B 细胞过度活化，以及浆母细胞过度增殖。B 细胞表现为与健康对照组、感染与肿瘤疾病对照组相比， sHLH 患者浆母细胞（ CD27+CD38+ ）百分比显著增加，与疾病对照组相比，初始 B 细胞（ CD27-IgD+ ）和记忆 B 细胞（ CD27+IgD- ）百分比显著下降。
因此，动态监测患者外周血免疫特征，一方面可以从免疫学层面更好地了解 HLH 发病机制，另一方面，可以辅助临床为早期识别和诊断、预后评估和个性化治疗提供参考依据。
03 脓毒症（ Sepsis ）的快速筛查和治疗预后评估
脓毒症（ Sepsis ）是宿主对感染反应失调所致危及生命的器官功能障碍。在脓毒症的发生发展过程中，始终存在着同时导致炎症反应亢进和免疫功能抑制的双重因素。脓毒症时出现不同 B 细胞亚群比例变化，记忆型 B 细胞比其他类型 B 细胞发生更多的凋亡；感染还造成初始 B 细胞持续减少、 B 细胞耗竭增加，提示参与获得性免疫反应的 B 细胞功能受损。
检测脓毒症、重症感染患者的 B 细胞及其亚群可帮助临床快速筛查和评估获得性免疫功能障碍，从而为及时治疗和预后评估提供依据。
04 自身免疫性疾病等的监测、预后和复发预测
自身免疫性疾病是指机体对自身抗原发生免疫反应从而导致自身组织损害的疾病， B 淋巴细胞在自身免疫性疾病的发生和发展过程中发挥重要作用。
在系统性红斑狼疮（ SLE ）中，记忆 B 细胞功能出现紊乱， B 细胞受体（ BCR ）的信号传导能力减退，且记忆 B 细胞群的再填充与 SLE 的复发相关，清除整个记忆 B 细胞群体是成功治疗 SLE 的关键。
在复发缓解型多发性硬化（ RRMS ）患者中，与复发期相比， D5+ 记忆 B 细胞亚群的增加与缓解期相关。此外，外周血记忆 B 细胞频率升高与扩展残疾状态评分降低相关。相反， RRMS 患者外周血中未转换记忆 B 细胞和类别转换记忆B细胞（ CD19+CD27+IgD+ 或 IgD- ）的增加与 MRI 表型高度神经退行性变有关。儿童和成人多发性硬化（ MS ）患者外周血中的记忆 B 细胞也不同。
在小儿多发性硬化症中，与健康儿童和青少年相比，外周血中记忆 B 细胞（ CD20+CD27+ ）升高。成人 MS 患者外周血类别转换记忆B细胞（ CD20+CD27+IgD- ）和浆细胞升高，而儿童 MS 患者未转换记忆 B 细胞（ CD20+CD27+IgD+ ）和浆细胞增多。
05 动脉粥样硬化性心血管疾病（ ASCVD ）的术后不良事件监测
动脉粥样硬化性心血管疾病（ Atherosclerotic cardiovascular disease，ASCVD ）是全球范围内导致人类死亡的首要原因，随着研究的深入，人们逐渐认识到动脉粥样硬化疾病实质是一种慢性炎性疾病，而 B 细胞作为重要的免疫细胞类型，在动脉粥样硬化的发生发展过程中发挥着关键作用。接受颈动脉内膜切除术的患者主要不良心血管事件的 3 年累积发生率较高。炎症增加是心血管事件复发的重要危险因素。为了确定特定的 B 细胞谱是否与继发性心血管事件相关，研究者测量了外周血 B 细胞亚型，发现未转换和转换的记忆 B 细胞都与现有心血管疾病患者的更好结果相关。这些发现表明 B 细胞亚群在预测和预防动脉粥样硬化患者继发性心血管事件方面具有潜在作用。
图 4.（未）转换的记忆细胞的数量增加与继发性不良心血管事件的风险降低有关
06 免疫治疗的靶点选择和疗效监测
B 细胞靶向治疗药物主要用于治疗各种癌症和自身免疫性疾病，使用过程中，除了针对其靶点监测其疗效，如利妥昔单抗为抗 CD20 抗体、达雷木单抗为抗 CD38 抗体，还需要全面系统规范、多维度的评估其疗效和安全性，其中就包括各类 B 细胞及其亚群的水平监测。
从 B 细胞靶向药物治疗机制来看，虽然利妥昔单抗、贝利尤单抗、泰它西普、艾拉莫德等药物的作用机制有所不同，但这些药物都有一个共同点：通过直接或间接阻断 B 细胞向浆母细胞发育的某些关键通路，从而降低产生自身免疫性抗体的浆细胞水平，减少抗体的产生。越来越多的研究证实，若以外周血浆母细胞水平作为判断标准，有助于更精准高效的个体化用药方案设计。
图5. 多种针对 B 细胞靶点的生物制剂
07 评估造血干细胞移植后 B 细胞亚群的重构
造血干细胞（ HSC ） 被广泛应用于一些疾病的治疗，包括骨髓衰竭综合征、白血病、淋巴瘤、多发性骨髓瘤（ MM ），某些遗传性血液疾病、自身免疫疾病以及作为代谢疾病中的酶替代物，并已取得了可观的疗效，成为干细胞研究和应用的成功范例。广义上说，造血干细胞移植（ HSCT ）已被当成一种使造血功能恢复正常、修复非造血状态或免疫功能的方法。
HSCT 后免疫重建较缓慢（至少需要数月），处于免疫缺陷状态下的患者易发生感染，移植后需对患者进行免疫重建监测（包括 T 细胞、 B 细胞和 NK 细胞亚群等），从而加强免疫管理、提高移植疗效和安全性以及评估移植后感染风险。
流式细胞仪及其配套解决方案
可检测样本
骨髓、外周血等标本
仪器和试剂
1.具备国际认可的标准化方案或专家共识中推荐的荧光染料标记和克隆号的流式检测抗体；
2.具备智能、多色、高性能的流式细胞仪，可满足稀有样本、多参数同时检测的需求；
3.部分机型支持样本回收功能，剩余的未被检测样本可自动回收至样本管内进行保存或进一步检测，对稀有样本友好；
4.高精度注射泵上样，样本体积精确控制，无需任何耗材直接绝对计数；
5.可选配自动上样器，实现孔板和试管架上批量样本的自动快速采集；
6.提供自动化的仪器 QC 测试功能，并跟踪一段时间的测试结果，确保提供一致的结果；
7.提供自动、手动两种荧光补偿方法，可以方便快速地实现多个荧光通道之间的正确补偿
8.配套 DNA 、淋巴细胞亚群、细胞因子等分析软件；此外采集样本并分析数据后可导出为模板文件，简化后续分析步骤、减少重复工作、提高工作效率。
参考检测方案
检测意义小结
结语：
多参数流式细胞术可以对包括 B 细胞亚群在内的多种免疫细胞进行检测和免疫功能进行评估，其在临床诊疗和健康管理中具有越来越重要的意义，通过建立精细化分析免疫细胞亚群方案，获得更多细胞亚群的健康人参考区间，将有助于进一步促进疾病筛查、预后评价和并发症防治以及健康管理等。
此文仅供科普，对患者的临床诊治应结合其症状/体征、病史、其它实验室检查及治疗反应等情况综合考虑。
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